說明：T4噬菌體DNA連接酶主要催化兩條DNA鏈上相鄰的5’磷

酸基和3’-羥基之間形成磷酸二酯鍵。它的主要用途是連接

帶匹配粘端的DNA分子，或使平端的雙鏈DNA分子互相連接

或與合成接頭相連接。也可催化DNA與RNA之間以及少數

RNA之間的連接，但不能催化單鏈DNA之間的連接。

單位定義：0.01Weiss單位的T4 DNA連接酶可以在16℃下反應

20分鐘，連接95％的1μgλDNA-HindⅢ的分解物。

注意：一個Weiss單位的T4 DNA連接酶相當于核酸外切酶測定

中的0.2單位或60個粘性末端(New England Biolabs)

存儲緩沖液：10mM Tris-HCl(pH7.5 25℃),50mM KCl，

1mM DTT，0.1mM EDTA和50％glycerol。

10×反應緩沖液：300mM Tris-HCl(pH7.8 25℃),

100mM MgCl2，100mM DTT，10mM ATP

質量控制：

1 活性：大于3Weiss單位/微升。

2 藍白克隆鑒定：12Weiss單位T4 DNA連接酶與3μg經內

切酶酶切產生的5’或3’粘性末端DNA在4℃下，反應16

小時后轉化到大腸桿菌JM109培養(yǎng)，白色菌落小于總菌落

數的2％；12 Weiss單位T4 DNA連接酶與3μg經內切酶酶

切產生的鈍性末端DNA在4℃下，反應16小時后轉化到大

腸桿菌JM109培養(yǎng)，白色菌落小于總菌落數的5％。

3 核酸內切酶測定：20Weiss單位酶與1μg超螺旋質粒

DNA在37℃下反應16小時，DNA的電泳圖譜不發(fā)生變化。

4 單鏈和雙鏈DNase測定：20Weiss單位酶與50ng同位素

標記的單鏈或雙鏈DNA反應16小時，單鏈DNA的釋放量

小于2％，雙鏈DNA的釋放量小于1％。

5 RNase測定：37℃時，20Weiss單位酶與50ng 3H-RNA

保溫5小時，釋放量小于1％。

6 蛋白純度：SDS PAGE 檢測純度≥90％。

儲存條件：?20℃

From Promega M1801S

北京冬璞泰和科技有限責任公司

聯系人：馬林

電話：010-57181378   13716040241

QQ：1815596477