調(diào)節(jié)性 T 細胞（Treg）可在惡劣的腫瘤微環(huán)境（TME）中存活增殖，從而抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答。腫瘤微環(huán)境中的慢性應(yīng)激會抑制經(jīng)典的帽依賴型翻譯（CDT），該過程會損傷效應(yīng) T 細胞的功能，卻不會影響調(diào)節(jié)性 T 細胞的存活。死亡相關(guān)蛋白 5（DAP5 / 真核翻譯起始因子 4G2）作為一種非經(jīng)典的翻譯支架蛋白，已有研究表明其可在體外促進人調(diào)節(jié)性 T 細胞的分化，但其在胸腺來源調(diào)節(jié)性 T 細胞的發(fā)育、外周調(diào)節(jié)性 T 細胞的穩(wěn)態(tài)維持，以及腫瘤浸潤性調(diào)節(jié)性 T 細胞（ti-Treg）存活能力調(diào)控中的作用仍不明確。

上海交通大學醫(yī)學院附屬上海市第一人民醫(yī)院團隊在Advanced Science發(fā)表題為” Targeting DAP5 Disrupts Alternate Mode of Translational Initiation in Tregs and Potentiates Antitumor Immunity”文章。

本研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)直腸癌患者和小鼠皮下腫瘤模型中，DAP5 的表達水平均與腫瘤浸潤性調(diào)節(jié)性 T 細胞的數(shù)量呈正相關(guān)。調(diào)節(jié)性 T 細胞中 Dap5 基因純合敲除的小鼠，其胸腺和外周調(diào)節(jié)性 T 細胞的發(fā)育過程未受影響，卻會自發(fā)出現(xiàn)典型的皮膚鱗屑樣病變。調(diào)節(jié)性 T 細胞中 Dap5 基因的單倍劑量不足，可在維持機體外周免疫穩(wěn)態(tài)的同時抑制腫瘤生長，且該過程中腫瘤組織內(nèi) CD8+T 細胞的浸潤程度和效應(yīng)功能均得到增強。機制研究表明，Dap5 可介導調(diào)節(jié)性 T 細胞中編碼 CD25 和 MCL-1 的轉(zhuǎn)錄本發(fā)生替代性翻譯，進而在應(yīng)激性的腫瘤微環(huán)境中維持調(diào)節(jié)性 T 細胞的譜系穩(wěn)定性與存活能力。

綜上，調(diào)節(jié)性 T 細胞依賴 DAP5 介導的替代性翻譯，維持自身的外周穩(wěn)態(tài)及在腫瘤微環(huán)境中獲得性的存活增殖能力。選擇性阻斷該通路可損傷腫瘤浸潤性調(diào)節(jié)性 T 細胞的功能，同時不會破壞機體的全身免疫耐受，為增強抗腫瘤免疫應(yīng)答提供了一種潛在的治療策略。

實驗部分

1. 樣本成像與信號捕獲

研究中對結(jié)直腸癌（CRC）患者的癌組織及癌旁組織樣本進行了福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）處理，并制作成組織芯片進行多色免疫熒光染色，目標標志物包括 CD3、CD19、CD4、FOXP3（Treg 特異性標志物）和 DAP5。TissueFAXS Spectra 系統(tǒng)，對染色后的組織切片進行全景掃描，精準捕獲不同標志物的熒光信號，確保細胞及分子定位的準確性。

2. 關(guān)鍵分子表達的定量分析

通過掃描成像后的數(shù)據(jù)處理，研究實現(xiàn)了對腫瘤浸潤性 Treg（ti-Treg）中 DAP5 表達水平的定量評估：

l 計算 DAP5 的平均熒光強度（MFI），對比癌組織中 ti-Treg 與癌旁組織中 Treg 的 DAP5 表達差異，發(fā)現(xiàn) ti-Treg 中 DAP5 表達顯著升高；

l 結(jié)合 FOXP3 陽性細胞的定位，明確 DAP5 高表達與 ti-Treg 在腫瘤微環(huán)境（TME）中的富集存在正相關(guān)（cor=0.263, p=0.034），為 “DAP5 與 ti-Treg 豐度相關(guān)” 這一核心結(jié)論提供了直接的臨床樣本證據(jù)。

3. 免疫微環(huán)境結(jié)構(gòu)的可視化驗證

在驗證 Dap5 敲除小鼠的免疫紊亂表型時，研究通過對脾臟組織進行 mIF 染色（CD3 標記 T 細胞、CD19 標記 B 細胞），利用 Tissue Cytometry技術(shù)觀察到荷瘤小鼠脾臟中生發(fā)中心（GC）結(jié)構(gòu)受損、B 細胞數(shù)量減少，直觀佐證了 Dap5 缺失對體液免疫的影響，補充了流式細胞術(shù)和分子生物學檢測的結(jié)果。

Figure 1 腫瘤浸潤性調(diào)節(jié)性 T 細胞中 DAP5 的高表達與腫瘤浸潤性調(diào)節(jié)性 T 細胞的浸潤程度相關(guān)

Figure 3 HO-Dap5ΔFoxp3表現(xiàn)出致死性自身免疫耐受缺陷